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長期:冷凍保藏
冷凍保藏是目前使用較為廣泛的長期保藏法之一,適用于所各類微生物,較之于斜面保藏,減少了工作量
延長了保藏時間。
1. 準備斜面或平板新鮮培養物一個,10%的無菌甘油溶液;
2. 用甘油溶液將菌體或孢子洗脫下來,形成菌懸液;
3. 菌懸液分裝,凍存管裝液 1mL/支,后置于程序降溫盒;
4. 將程序降溫盒置于-80℃℃冰箱凍存;
5. 可保藏 1-2 年。
活化使用:
1. 將凍存菌株置干凍存盒中取出,準備水浴溶解,切勿常溫融化;
2. 將菌株訊速置干水浴速溶,細菌 40℃,直菌 30℃,約 2min 全部溶解后接種到適宜培養基:

3. 采用適宜條件培養完成即可。

收到細胞后的處理:

1)收到細胞后,首先觀察瓶身是否完好(注意有無縫隙,裂痕)。

2)顯微鏡下觀察細胞的生長狀況,有無細胞漂浮。

3)用新潔爾滅消毒瓶口及瓶身。

4)打開瓶口,再次用新潔爾滅消毒瓶口(可能會有液體溢出,注意不要碰到液體),酒精燈烤瓶口消毒。

5)將培養液轉移至50ml離心管或廣口瓶中(若細胞漂浮嚴重,離心培養基,1000g*5分鐘,將離心后的培養基轉移至另一個大離心管中,留一點吹打細胞沉淀成懸液,回收細胞至原培養瓶),若漂浮不嚴重,亦離心一下。

6)在原培養瓶中留一部分原裝培養液,再補加自己新配的培養基至適當容積,例如4ml,讓細胞適應一下環境。  當細胞長到70-80%,凍存大部分,小部分傳代。