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ELISA試劑盒的制備和結構檢測
發表時間:2023-04-24
ELISA試劑盒是一種常用于檢測生物分子(如蛋白質、抗體等)的分析工具。其制備和結構檢測通常包括以下步驟:
制備步驟:
1.表面涂層:將需要檢測的分子(如蛋白質、抗原等)固定在微孔板(plate)的表面上,一般使用化學交聯或物理吸附等方法實現。
2.阻斷:用一些不與被檢測分子反應的蛋白質(如牛血清白蛋白、干酪蛋白等)來阻斷微孔板上未被固定的表面,避免后續的假陽性結果。
3.加入抗體:加入一種特異性抗體,與被檢測分子結合。
4.加入檢測物:通常是酶標記的二抗或其他蛋白質,可以與抗體結合,形成信號。
5.加入底物:底物與酶結合,可以被測量(如顏色變化等)。
6.檢測:測量樣品中的信號,以此來確定被檢測分子的存在或濃度。
結構檢測步驟:
1.
SDS-PAGE:使用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對試劑盒中的蛋白質進行分離和純化,以確保試劑盒中所含蛋白質的純度和相對分子質量。
2.Western blotting:將SDS-PAGE中分離的蛋白質轉移到膜上,使用特異性抗體檢測試劑盒中的蛋白質,以確定試劑盒中是否含有正確的蛋白質。
3.HPLC:使用高效液相色譜(HPLC)等方法對試劑盒中的小分子化合物進行分離和純化,以確保試劑盒中所含化合物的純度和含量。
制備步驟:
1.表面涂層:將需要檢測的分子(如蛋白質、抗原等)固定在微孔板(plate)的表面上,一般使用化學交聯或物理吸附等方法實現。
2.阻斷:用一些不與被檢測分子反應的蛋白質(如牛血清白蛋白、干酪蛋白等)來阻斷微孔板上未被固定的表面,避免后續的假陽性結果。
3.加入抗體:加入一種特異性抗體,與被檢測分子結合。
4.加入檢測物:通常是酶標記的二抗或其他蛋白質,可以與抗體結合,形成信號。
5.加入底物:底物與酶結合,可以被測量(如顏色變化等)。
6.檢測:測量樣品中的信號,以此來確定被檢測分子的存在或濃度。
結構檢測步驟:
1.
SDS-PAGE:使用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對試劑盒中的蛋白質進行分離和純化,以確保試劑盒中所含蛋白質的純度和相對分子質量。
2.Western blotting:將SDS-PAGE中分離的蛋白質轉移到膜上,使用特異性抗體檢測試劑盒中的蛋白質,以確定試劑盒中是否含有正確的蛋白質。
3.HPLC:使用高效液相色譜(HPLC)等方法對試劑盒中的小分子化合物進行分離和純化,以確保試劑盒中所含化合物的純度和含量。
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